熒光定量服務(wù)都有哪些內(nèi)容和要求？
點(diǎn)擊次數(shù)：2909 更新時(shí)間：2020-09-24
在PCR擴(kuò)增中，添加了一對(duì)引物和特異性熒光探針。該探針是線性寡核苷酸，其兩端分別標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)和熒光猝滅基團(tuán)。探針完成后，報(bào)告基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，無(wú)法用PCR儀檢測(cè)到。在PCR擴(kuò)增過程中（延伸階段），探針被Taq酶的5'-3'核酸外切酶活性消化并降解，從而使報(bào)告熒光團(tuán)和淬滅熒光團(tuán)分離，從而使熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)能夠接收到熒光。信號(hào)，即每個(gè)擴(kuò)增的DNA鏈，都有一個(gè)熒光分子形成，從而使熒光信號(hào)的積累與PCR產(chǎn)物的形成*同步，這是
熒光定量服務(wù)的基礎(chǔ)。那么它服務(wù)的內(nèi)容和要求是什么？
一、服務(wù)內(nèi)容：
1、從動(dòng)物細(xì)胞，人或動(dòng)物組織中提取核酸；
2、分析核酸的濃度和純度；
3、熒光定量服務(wù)PCR檢測(cè)；
（1）引物和探針的設(shè)計(jì)與合成；
（2）定量和相對(duì)定量的選擇；
（3）探針法和染料法的選擇；
（4）通過熒光定量PCR檢測(cè)目標(biāo)基因；
（5）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析；
4、實(shí)驗(yàn)前服務(wù)：根據(jù)客戶提供的目標(biāo)基因序列或NCBI序列號(hào)提供客戶引物和探針，并選擇引物和探針；
5、正式實(shí)驗(yàn)服務(wù)：根據(jù)初步實(shí)驗(yàn)中選擇的引物和探針，通過熒光定量PCR檢測(cè)樣品，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
二、熒光定量服務(wù)要求：
1、請(qǐng)?zhí)峁┍M可能多的新鮮材料（各種材料的RNA提取量請(qǐng)參考“總RNA提取”），或直接提供純化的總RNA（大于5ug/樣品）；（有關(guān)各種材料的DNA提取量，請(qǐng)參閱“DNA提取”），或直接提供純化的DNA（大于5ug/樣品）。
2、請(qǐng)通過電子郵件提供已知的全長(zhǎng)基因序列。
3、請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景信息：DNA/RNA來(lái)源，豐度等。
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